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稳转细胞株构建

稳定细胞株构建

外源基因在细胞中的表达可分为两大类,一类是瞬时表达,外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中,虽然可以达到高水平的表达,但通常只持续几天;一类是稳定表达(构建稳转株),外源DNA整合到宿主细胞染色体上,使宿主细胞可长期表达目的基因。
建立稳定细胞株,基本原理是将外源DNA克隆到具有某种抗性的载体上,载体被转染到宿主细胞并整合到宿主染色体中,用载体中所含的抗性标志进行筛选。最常用的真核表达载体的抗性筛选标志物有新霉素(neomycin)、潮霉素(hygromycin)和嘌呤霉素(puromycin),筛选得到可稳定表达目的蛋白、或稳定沉默特定基因的细胞株。
筛选方法
慢病毒感染筛选稳定细胞株
利用慢病毒整合表达特性来筛选稳定细胞株,该方法克服了传统质粒挑单克隆方法周期久的弊端,可以在短时间内高效获取稳定细胞株。

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