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慢病毒(Lentivirus/Lv)属于逆转录virus科,名称源自该种virus长达数年的潜伏期,其中较为人所知的是人类免疫缺陷virus(HIV-1)。HIV-1 直径约 120nm,含两条正链 RNA,可有效的进入细胞核中,对分裂期细胞及非分裂期细胞均具有很高的感染效率。慢病毒感染细胞后可将所携带的基因整合到细胞基因组中,并且长时间持续稳定表达,同时能够随细胞分裂稳定遗传下去,因此成为导入外源基因的有效工具。
慢病毒载体是以 HIV-1 为基础改造获得的基因治疗载体,通过去除致病基因,同时减少辅助质粒与载体质粒的同 源性,使慢病毒具有了滴度更高、生物安全性更好、导入外源片段的能力更强等特性。目前慢病毒系统已经广泛应用到基因过表达、RNA 干扰、miRNA 研究及基因敲除等功能研究的细胞实验和动物实验中。
慢病毒包装流程
慢病毒的 MOI 预实验步骤(以 96 孔板为例):
慢病毒优势
1、感染范围广
慢病毒可有效感染分裂和非分裂细胞,适合几乎所有细胞系,如神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等。
2、表达时间长
慢病毒可将外源基因整合到宿主细胞基因组上,实现基因长时间稳定的表达,不随细胞分裂传代而丢失,常用于构建稳定株,是细胞实验的较优选择。
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普通真核质粒 | 慢病毒 | 腺病毒 |
腺相关病毒 |
| 基因组 | dsDNA | dsRNA | dsDNA | ssDNA |
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外源基因装载量 |
大于10kb | 小于4kb | 小于5kb | 小于2.5kb |
| 基因组整合 | 随机低频整合 | 随机高频整合 | 非整合 | 低频定向整合 |
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表达起始时间(细胞) |
1-2天 | 3-4天 | 1-2天 | 1-2天 |
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表达起始时间(动物) |
-- | 1周 | 2-4天 | 2-4周 |
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表达持续时间 |
1周左右 | 整合后持续表达 | 2周左右 | 3-6个月 |
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免疫原性 |
低免疫原性 | 低免疫原性 | 高免疫原性 | 低免疫原性 |
客户发表文章(部分):
1、Characterization of novel LncRNA P14AS as a protector of ANRIL through AUF1 binding in human cells. 2020 , Molecular Cancer (IF=27.401) . 合生产品:质粒载体/慢病毒包装试剂盒 ,北京大学肿瘤医院
2、A microbiota-derived bacteriocin targets the host to confer diarrhea resistance in early-weaned piglets. 2018 , Cell Host & Microbe(IF=20.56). 合生产品:Cas9基因敲除质粒, 华中农业大学
3、Gasdermin E–mediated target cell pyroptosis by CAR T cells triggers cytokine release syndrome. 2020 , Science Immunology(IF=17.448). 合生产品:过表达质粒, 中国医学科学院北京协和医院
4、YTHDF2 facilitates UBXN1 mRNA decay by recognizing METTL3-mediated m6A modification to activate NF-κB and promote the malignant progression of glioma. 2021 , Journal of Hematology & Oncology (IF=17.388). 合生产品:干扰慢病毒
5、Improved sgRNA design in bacteria via genome-wide activity profiling. 2018,Nucleic Acids Research(IF=16.971). 合生产品: CRISPR/Cas9个性化转录抑制文库,清华大学
6、Pooled CRISPR interference screening enables genome-scale functional genomics study in bacteria with superior performance. 2018 , Nature Communications(IF=14.919). 合生产品: CRISPR/dCas9个性化转录抑制文库,清华大学
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