CRlSPR/Cas9 gRNA文库

基因文库是对基因的扩展延伸，是囊括括一整套相关基因的集合，也是研究复杂基因相互作用的必要工具库。gRNA(guide RNA) 是一种引导Cas9蛋白编辑特定序列的短链RNA。gRNA文库的建立是重要基因功能的筛选、疾病机制研究及药物研发等前沿生物研究的基础 。利用CRlSPR/Cas9技术建立哺乳动物全基因组突变库或者与某类功能相关的基因突变体库，通过功能性筛选和富集以及随后的PCR扩增和深度测序分析，发掘与筛选表型相关的基因，称为CRlSPR/Cas9 gRNA文库筛选。gRNA文库是药物筛选或靶向筛选特定通路的理想工具，gRNA文库的建立将在功能基因筛选、疾病机制研究及药物研发等方面发挥重要的功能。

构建流程

CRlSPR/Cas9 gRNA文库筛选流程分为五步

1.gRNA文库选择

2.gRNA文库扩增

3.gRNA文库慢病毒包装

4.gRNA文库筛选

5.PCR扩增和NGS测序

图1. 文库构建流程示意图

文库质控标准

     1.小于12000个shRNA/gRNA的文库，10 fold覆盖度>75%，shRNA/gRNA覆盖度>95%；

     2.大于12000个shRNA/gRNA的文库，10 fold覆盖度>70%，shRNA/gRNA覆盖度>90%。

图2. 文库质控

服务内容

合生生物可根据客户制定针对特定基因分类的gRNA/shRNA文库，包括全基因组文库、lncRNA文库、信号通路、细胞凋亡、细胞增殖、离子通道、核受体相关、各种疾病相关文库等。除了pool plasmid gRNA/shRNA文库以外，还可以根据客户需要对 gRNA/shRNA文库进行病毒包装，最终以gRNA/shRNA病毒文库形式交付。同时合生生物一流的生物信息学团队可为客户提供专业可靠的 gRNA/shRNA设计和文库质控分析，保证产品可直接用于高通量药物靶标以及功能基因的筛选。

     具体服务类型可分为：

1. 人全基因组gRNA文库，总计120000条sgRNA(包含19000个基因，每个基因6条sgNRA;1800条miRNA, 每条设计4条miRNA, control sgRNA 1000条 )

2. 人全基因组转录激活文库，总计70000条sgRNA 

3. 个性化gRNA文库靶点设计及构建

4. 病毒包装，将全库质粒或定制质粒包装成慢病毒，感染细胞。

5. 文库病毒感染细胞，高通量筛选服务